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特殊生物的超低溫保存法

更新時間:2019-08-29      瀏覽次數:2218

 1.大多數微生物可用超低溫保存,超低溫保存法是適用范圍廣的微生物保存法:

 通常可用超低溫的方法保存(ATCC 1983;Halliday,Baker 1985)。此法是將凍存在小管或安瓿里的細胞以較慢的冷凍速率(1℃/分鐘)冷凍,直至—150℃,再將這些小管貯存在—150~-196℃的液氮中。

   超低溫保藏的微生物必須始終貯存在溫度非常低的環境中,因此需要液氮罐

在長期貯存的過程中必須經常注意補充液氮。這種貯存方式比凍干法需要更多的經費,包括為了維持貯存溫度所必要的勞動力和液氮等。
2 材料
  病毒超低溫保存所需材料有:熱收縮塑料管(Nunc Cryoflex),液氮罐,防護手套和面罩,久性記號筆,氣體噴燈,裝液氮的保溫瓶。
3 方法
  (1)剪一段兩端各超出冷凍管長度2cm 的熱收縮塑料管。
  (2)將含有澄清病毒懸液(組織培養的上清培養基,或組織培養基內的細胞溶解產物均可)冰浴幾分鐘,用滅菌移液管將0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內,并將蓋子擰緊。
  (3)將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部,插入正確的標簽。
  (4)用噴燈小心加熱熱收縮塑料管,并使之包住冷凍管。注意不要用太高的溫度加熱熱收縮塑料管。

  (5)再小心加熱熱收縮塑料管的兩端,用大號鑷子夾緊管的端口至*密封。
  (6)將密封好的冷凍管快速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍(操作時要求戴面罩和手套)。
  (7)將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內,同時記錄樣品的詳細的存放位置、實驗編號和存放日期等。
  (8)需要用時,迅速從液氮罐內取出所需樣品,并投入37℃水浴箱中解凍后,用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時不需要除去熱收縮塑料管。

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